纯化核酸是指将样品中的杂质去除,只保留核酸,这是分析DNA或RNA必须的步骤。下面将介绍纯化核酸的操作步骤及注意事项。
操作步骤:
- 将所需的培养物或组织,放入离心管中,并加入所需的核酸提取缓冲液。
- 加入适量的蛋白酶溶液。
- 破碎细胞,使核酸溶于缓冲液中。
- 加入适量乙酰盐和异丙醇,形成上清液和下层物。
- 将上清液转移至新的离心管中,加入等体积的异丙醇。
- 加入氯仿,并震荡5~10秒。
- 离心5分钟,将上清液转移至新的离心管中,加入等体积的异丙醇。
- 重复5~7步操作,直至样品溶液中呈现白色粘稠的DNA。
注意事项:
- 操作过程中要避免核酸的污染,可以佩戴手套,使用无菌器具。
- 核酸提取缓冲液和蛋白酶溶液应用新鲜制备。
- 操作中应注意异丙醇和氯仿的使用量,过多会影响纯化效果。
- 操作过程中应注意氯仿的毒性,避免接触皮肤和吸入氯仿气体。
- 建议操作者应具备一定的分子生物学实验基础,并按照正确的操作步骤进行操作。