细胞毒性实验是评价化合物或药物危害性的一种重要方法。但是在进行实验时带有一定的风险,在选择药物、评价结果时也要注意一些事项。
一、实验前准备
1.1 正确选择细胞株
针对不同细胞类型进行选择可以提高实验效果,小鼠红血球和鳕鱼肝细胞是比较常见的细胞株。此外,不同类型的药物或化合物可能更适合某一类型的细胞。
1.2 保护好自己
毒性试验前要正确佩戴防护用品:手套、口罩、护目镜、实验服等。实验操作要轻柔,避免溅出试剂或药物。
二、常用方法
2.1 SRB法(硫黑法)
测定药物对细胞生长的影响,适用于各种类型的细胞。须要温和的脱离细胞底物蛋白,接着把细胞与硫黑(SRB)染料相接触,经过洗涤、溶解、检测
2.2 MTT法
MTT法(3-(4,5-二甲基-2-噻唑唑)-2,5-二苯基-2H-四唑溴化物)测定药物对细胞代谢的影响。细胞代谢酶(如辅酶A,NADH,NADPH)可以加速MTT进入细胞质内,被转变成紫色物质。适用于体外抗肿瘤药物的筛选。
注意:以上方法均需在合适时间点采集实验数据,尽可能减小误差。